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T**細胞轉化實(shí)驗的基本原理


T**細胞轉化實(shí)驗的基本原理
     
T細胞在體外培養時(shí),受到非特異性有絲分裂原(如PHA、ConA)刺激后,可出現細胞體積增大,代謝旺盛,蛋白和核酸合成增加,即向**母細胞轉化.**細胞轉化率的高低可以反映機體的細胞**水平,因此可作為測定機體**功能的指標之一.
T 細胞在體外培養時(shí),受到非特異性有絲分裂原(如PHA、ConA)刺激后,可出現細胞體積增大,代謝旺盛,蛋白和核酸合成增加,即向**母細胞轉化.**細胞轉化率的高低可以反映機體的細胞**水平,因此可作為測定機體**功能的指標之一.
**細胞轉化試驗有形態(tài)計數法、MTT 法和同位素法三種.MTT 法即四甲基偶氮唑鹽微量酶反應比色法.MTT 是一種噻唑鹽,化學(xué)名3-(4,5-二甲基-2-噻唑)-2,5-二苯基溴化四唑,水溶液為黃橙色.小鼠脾細胞受到ConA 作用后發(fā)生增殖活化,其胞內線(xiàn)粒體琥珀酸脫氫酶活性相應升高,MTT 作為其底物參與反應,形成藍色的甲臜(Formazan)顆粒沉積于細胞內或細胞周?chē)?經(jīng)鹽酸─異丙醇溶解后為藍色溶液,可用酶標測定儀測定細胞培養物的OD 值,測定波長(cháng)570nm.根據OD 值的大小計算反應體系中細胞增殖程度.
3H-TdR 摻入法:細胞增殖的基本條件或前提為細胞質(zhì)和細胞核的復制,這是正常細胞增殖過(guò)程缺一不可的前提.一般來(lái)說(shuō),一個(gè)細胞周期可大致分為四期,即G1 期、S期、G2 期和M期.其中S期為DNA合成期,主要功能活動(dòng)為DNA合成.3H-TdR即(甲基-3H)胸腺嘧啶核苷([3H-methyl]thymidine),是DNA合成的前體.加入細胞培養液中后被細胞攝取作為DNA合成的原料.細胞合成的DNA越多,則所摻入的3H-TdR就越多,因此,檢測所摻入的3H-TdR就可反映細胞增殖的程度.因該方法有同位素污染問(wèn)題,故我們實(shí)習中仍用MTT法.
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